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Biozellen?高濃度小鼠皮下成瘤基質膠試劑盒
產品概述：
Biozellen?高濃度小鼠皮下成瘤基質膠試劑盒
Catalog No B-P-00004-2、B-P-00004-4、B-P-00004-5、B-P-00004-10
Specification 2ml-kit、4ml-kit 、5ml-kit 10ml-kit
Storage 4℃保存、 保存兩年
一、產品描述
Biozellen?3D 高濃度小鼠皮下成瘤基質膠試劑盒是以合成生物原料構建細胞外基質微環境,無人畜共患病源菌及內毒素風險、高活性、高穩定性、高生物兼容性及安全性、室溫即可操作、注射容易、可自由調整膠體硬度，應用于各種小鼠癌癥模型的成瘤試驗
二、應用
?應用于各類癌癥模型的 in vivo 成瘤試驗
三、適用細胞種類
? 一般細胞株
? 腫瘤細胞株
? 腫瘤免疫細胞株
四、試劑盒組分
B-P-00004-10 （對應數量和內容） | |||
貨號 | Components | Amount | Content |
B-P-00004-M | MH Gel (1X） | 1 | 5mL / tube |
B-P-00004-R | R Buffer (1X) | 1 | 5mL / tube |
五、小鼠皮下成瘤試驗步驟：
操作流程圖
【細胞房材料、試劑及膠體準備步驟】
(1)材料準備步驟
? 37 ℃ 水浴槽或培養箱
? MH膠 (1X)
? R緩沖溶液 (1X)
? 不含血清的DMEM培養液
? 24G 針頭
? 1毫升針筒
? 癌細胞株
（2）試劑準備步驟
1、MH膠 (1X)制備步驟:將MH膠 (1X)置于37 ℃水浴槽或是培養箱回溫至少10分鐘，確認完全溶解。
注1:為確保溶解后的膠體流動性，請在進行MH膠添加步驟時，再將MH膠從37 ℃水浴槽或是培養箱拿出，可降低膠體的黏稠度。
注2: MH膠為單次使用，勿重復冷凍解凍膠體；建議收到MH膠后請進行分裝保存以便后期使用。
2、R緩沖溶液 (0.25X)制備步驟:先以37 ℃ 水浴回溫DMEM培養液，取1.25 毫升R緩沖溶液 (1X)與3.75 毫升回溫的DMEM培養液，充分混合均勻。
注3:若要配置高硬度膠體，建議可制備R緩沖溶液 (0.5X)濃度。當R緩沖溶液濃度越高，所調配的膠體硬度則越高。R緩沖溶液 (0.5X) 制備步驟:取2.5 毫升R緩沖溶液 (1X)與2.5毫升DMEM培養液，充分混合均勻。
注4:R緩沖溶液在使用前請放置37 ℃ 水浴槽內。若未使用完畢，可保存于4 ℃ 冰箱，期限為一周。
（3）膠體準備步驟
1、取適量癌細胞株懸浮液，經離心后收集細胞沉淀，再與R緩沖溶液 (0.25X)均勻混合，使細胞濃度為 4*106 cells/mL。
2、MH (1X)膠與步驟1的含R緩沖溶液 (0.25X)的癌細胞混合液，以1:1比例混合均勻，癌細胞株懸浮液最
濃度為2*106 cells/mL。例如:5 毫升MH (1X) 膠與5 毫升含R緩沖溶液(0.25X)的癌細胞混合液，充分混合均勻。R緩沖溶液用于MH膠的凝膠反應
注5:若要配置高硬度膠體，建議可使用MH (1X)膠與含R緩沖溶液(0.5X)的癌細胞混合液，以1:1比例混合均勻。
3、選用23-26 G的針頭 (建議選用24 G)及1 毫升針筒，抽取步驟2含癌細胞株的混合膠體，室溫25 ℃下進行抽取操作，抽取所需注射體積(例如:0.2 毫升)，再于室溫下靜置至少10分鐘。
注6:若抽取時發生塞針狀態，可先把針頭拔掉，以針筒進行抽取，建議一次抽取配置好所需針筒數量，避免步驟2溶液過度凝膠，發生塞針現象。
4、將抽取完成的步驟3注射針筒，室溫運送至動物房。
【動物房材料及動物注射準備步驟】
(1)材料準備步驟
1.含 MH 膠與 R 緩沖溶液的癌細胞株混合膠體的注射針筒
2.皮膚消毒劑 (例如 : 酒精)
3.手套
4.建議以 5-6 周齡的實驗免疫缺陷小鼠進行實驗
5.麻醉老鼠的試劑
(2)動物注射準備步驟
1.室溫下直接注射。將含 MH 膠與 R 緩沖溶液的癌細胞株混合膠體的注射針筒，以皮下注射方式，注射實驗所需的體積至實驗鼠上。
注 1:建議皮下注射量為 0.2 毫升，實際狀況依需求而定。注射時若因凝膠緣故而阻力變大，需緩慢注射避免針頭噴落。
注 2:以大腸直腸癌細胞株為例，注射細胞濃度及體積建議如下。
癌細胞 | 細胞濃度 | 注射體積 | 注射部位 | 小鼠類型 |
HCT 116 | 2*106cells/mL | 0.2ml | 皮下注射 | C.B17/Icr-Prkdcscid/CrlNarl |
2. 每周觀察量測接種的腫瘤尺寸，在飼養 4-5 周后可摘取腫瘤組織。
注 3:以大腸直腸癌細胞株 HCT 116 為例，小鼠于飼養 4 周后，腫瘤組織大小可達 1000mm3 以上。
補充材料
圖一:以大腸直腸癌細胞株 HCT 116，進行小鼠皮下成瘤試驗。
1.無生長因子膠體設計，避免生長因子干擾實驗，降低實驗誤差，使小鼠皮下成瘤體積大小更加一致。
2.MH 膠維持與 Matrigel 相似的腫瘤生長速度，于 4 周后腫瘤組織大小可達 1000 mm3 以上，可進行摘取。于 3 周后，即可進行藥物測試。
參考文獻
1.A.T., Elizabeth, et al., Bio Protoc. 2017, 7(1). doi: 10.21769/BioProtoc.2100, (2017)
2.Yuqin Yao, et al., Oncol Lett. 2015, 10(6). doi: 10.3892/ol.2015.3764, (2015).
3.Marrella, A. et al., Polymers 2018, 10(4), 380. doi: 10.3390/polym10040380, (2018).
僅供研究使用
